1.常见样本类型：

分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等样本中的非洲猪瘟。

2.. 样品预处理方式（样本处理区）

2.1 样本前处理

2.1.1组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取

0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心2min，取上清液 200μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；病样组织直接上机提取也有实验室在用（江苏泰州农委）

2.1.2全血样本：取全血离心后的上清（血清） 200μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

相关实验设备：动物组织研磨仪、手持式电动组织研磨仪

2.2样本保存和运输

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 蓝冰和干冰运输，严禁反复冻融。

2.3 DNA 提取

对上述处理好的标本加入到预装好提取试剂的96深孔板中，将加好样本的耗材放置到96全自动核酸提取仪中提取核酸。

3. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，将上游引物、下游引物、荧光定量探针、酶液预混好，将混合好反应液分装到 PCR 反应管中。举例如下：

4. 加样（样本处理区）

将提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取一定量，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

5.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

5.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 20μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

5.3 相关设备：

BTK-6 荧光PCR仪、BTK-10 超快速荧光PCR仪、ABI7500、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

6. 结果分析判定

按照非洲猪瘟核酸检测试剂盒指导进行判读。